本法是用紫外-可見分光光度法（通則0401）或高效液相色譜法（通則0512）測定維生素A及其制劑中維生素A的含量，以單位表示，每單位相當于全反式維生素A醋酸酯0.344μg或全反式維生素A醇0.300μg。
測定應在半暗室中盡快進行。

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第一法（紫外-可見分光光度法）
由于維生素A制劑中含有稀釋用油和維生素A原料藥中混有其他雜質，采用紫外-可見分光光度法測得的吸光度不是維生素A獨有的吸收度。在以下規定的條件下，非維生素A物質的無關吸收所引人的誤差可以用校正公式校正，以便得到正確結果。
校正公式采用三點法，除其中一點是在吸收峰波長處測得外，其他兩點分別在吸收峰兩側的波長處測定，因此儀器波長應準確，在測定前，應對儀器波長進行校正。
測定法 取供試品適量，精密稱定，加環己烷溶解并定量稀釋制成每1ml中含9～15單位的溶液，照紫外-可見分光光度法（通則0401），測定其吸收峰的波長，并在下表所列各波長處測定吸光度，計算各吸光度與波長328nm處吸光度的比值和波長328nm處的（）值。

另精密稱取供試品適量（約相當于維生素A總量500單位以上，重量不多于2g），置皂化瓶中，加乙醇30ml與50%氫氧化鉀溶液3ml，置水浴中煮沸回流30分鐘，冷卻后，自冷凝管頂端加水10ml沖洗冷凝管內部管壁，將皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉潤滑劑），皂化瓶用水60～100ml分數次洗滌，洗液并入分液漏斗中，用不含過氧化物的乙醚振搖提取4次，毎次振搖約5分鐘，第一次60ml，以后各次40ml，合并乙醚液，用水洗滌數次，每次約100ml，洗滌應緩緩旋動，避免乳化，直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色，乙醚液用鋪有脫脂棉與無水硫酸鈉的濾器濾過，濾器用乙醚洗滌，洗液與乙醚液合并，置250ml量瓶中，用乙醚稀釋至刻度，搖勻；精密量取適量，置蒸發皿內，微溫揮去乙醚，迅速加異丙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中含維生素A9～15單位，照紫外-可見分光光度法（通則 0401），在 300nm、310nm、325nm與334nm 四個波長處測定吸光度，并測定吸收峰的波長。

第二法（高效液相色譜法）
本法適用于維生素A醋酸酯原料及其制劑中維生素A的含量測定。
色譜條件與系統適用性試驗 用硅膠為填充劑；以正己烷-異丙醇（997：3）為流動相；檢測波長為325nm。取系統適用性試驗溶液10μl，注入液相色譜儀，調整色譜系統，維生素A醋酸酯峰與其順式異構體峰的分離度應大于3.0。精密量取對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，連續進樣5次，主成分峰面積的相對標準偏差不得過3.0%。
系統適用性試驗溶液的制備 取維生素A對照品適量（約相當于維生素A醋酸酯300mg），置燒杯中，加入碘試液0.2ml，混勻，放置約10分鐘，定量轉移至200ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻。
測定法 精密稱取供試品適量（約相當于15mg維生素A醋酸酯），置100ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻， 精密量取5ml，置50ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取維生素A對照品適量，同法制成對照品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
【附注】
（1）甘油淀粉潤滑劑 取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加熱至140℃，保持30分鐘并不斷攪拌，放冷，即得。
（2）不含過氧化物的乙醚 照麻醉乙醚項下的過氧化物檢查，如不符合規定，可用5%硫代硫酸鈉溶液振搖，靜置，分取乙醚層，再用水振搖洗滌1次，重蒸，棄去首尾5%部分，餾出的乙醚再檢查過氧化物，應符合規定。
（3）若維生素A對照品中含有維生素A醋酸酯順式異構體，則可直接以對照品溶液作為系統適用性溶液，不必再做破壞性實驗。